A tripszinezés a sejt disszociációjának folyamata, amelynek során tripszint, egy proteolitikus enzimet használnak, amely lebontja a fehérjéket, hogy leválasztja a tapadó sejteket az edényről, amelyben azokat tenyésztik. Sejttenyészethez adva a tripszin lebontja azokat a fehérjéket, amelyek lehetővé teszik a sejtek számára, hogy az érhez tapadjanak.
Miért tripszinezzük a sejteket?
A tripszinezést gyakran azért végzik, hogy engedélyezzék a sejtek új tartályba való átjutását, kísérletezés céljából megfigyelést vagy a lombikban való összefolyás mértékének csökkentését a a sejtek.
Hogyan működik a tripszin a sejtek leválasztásában?
A tripszin/EDTA egy kombinált módszer a sejtek leválasztására. A tripszin levágja az adhéziós fehérjéket a sejt-sejt és sejt-mátrix kölcsönhatásokban azáltal, hogy levágja az adhéziós fehérjék aminosavait specifikusan a lizinnél vagy agininnél a C-terminálison, ha az upstream aminosav nem prolin.
Hogyan kaphatunk tripszinezett tapadó sejteket?
Eljárás
- Szívással távolítsa el a táptalajt a tenyésztőedényből, és mossa át az egyrétegű réteget Ca2+ és Mg mentes sóoldattal. 2+ a szérum minden nyomának eltávolításához. …
- Adagoljon elegendő tripszint vagy tripszin/EDTA-oldatot a tenyésztőedény(ek)be, hogy teljesen lefedje az egyrétegű sejteket, és helyezze 37 °C-os inkubátorba ~2 percre.
Hogyan tilthatom le a tripszint a sejttenyészetben?
Miután a cellák leválva jelennek meg, adjunk hozzá 2 kötetetelőmelegített teljes táptalajt atripszin inaktiválására. Óvatosan diszpergálja a táptalajt úgy, hogy többször pipettázzon a sejtréteg felületére, hogy biztosítsa a sejtek >95%-ának visszanyerését. Szérummentes tenyészetekhez szójabab tripszin inhibitor (termékszám: