Minél nagyobb a molekulatömeg, annál hosszabb a tekercs, és annál lassabban halad a molekula. Tehát elektroforézis + SDS molekulatömeg alapján válik szét, nem natív töltés alapján. Fontos megjegyzés: Az azonos hosszúságú fehérjéket általában nem lehet szétválasztani gélelektroforézissel + SDS-sel.
Hogyan lehet szétválasztani az azonos molekulatömegű fehérjéket?
A centrifugálás, az elektroforézis és a kromatográfia a fehérjék tisztításának és elemzésének leggyakoribb technikái. A centrifugálás az ülepedési sebességük alapján választja el a fehérjéket, amelyet a tömegük és alakjuk befolyásol.
Mely technikák választják el a fehérjéket töltés alapján?
A fehérjék a nettó töltésük alapján ioncserélő kromatográfiával szétválaszthatók. Ha egy fehérje nettó pozitív töltésű 7-es pH-értéken, akkor általában egy karboxilátcsoportokat tartalmazó gyöngyökből álló oszlophoz kötődik, míg a negatív töltésű fehérje nem (4.4. ábra).
Az alábbi technikák közül melyik a legalkalmasabb a fehérjék molekulatömeg alapján történő elválasztására?
A megosztáson alapuló kromatográfiás módszerek nagyon hatékonyak az elválasztásban és a kis molekulák aminosavak, szénhidrátok és zsírsavak azonosításában. Azonban affinitáskromatográfiák (azaz ioncserélő kromatográfia) hatékonyabbak a makromolekulák, mint nukleinsavak és fehérjék szétválasztásában.
Milyen típusú oszlopa kromatográfia molekulatömeg alapján választja el a fehérjéket?
A gélszűrős (GF) kromatográfia kizárólag molekulaméret alapján választja el a fehérjéket. Az elválasztást porózus mátrix segítségével érik el, amelyhez a molekulák sztérikus okokból eltérő mértékben férnek hozzá – azaz a kisebb molekulák jobban hozzáférnek, a nagyobb molekulák pedig ki vannak zárva a mátrixból.
