Miután a sejtek leválnak, adjunk hozzá 2 térfogat előmelegített teljes táptalajt a tripszin inaktiválásához. Óvatosan diszpergálja a táptalajt a sejtréteg felületén többszöri pipettával, hogy biztosítsa a sejtek >95%-ának visszanyerését.
Hogyan állíthatom le a tripszin aktivitást?
A tripszin emésztése fagyasztással vagy a reakció pH-értékének pH 4 alá csökkentésével hangyasav, ecetsav vagy trifluor-ecetsav hozzáadásával leállítható (a tripszin visszanyeri aktivitását, ha pH 4 fölé emelkedik). Az emésztett minták -20°C-on tárolhatók.
Mi semlegesíti a tripszint?
A kalcium- és magnéziumionokat tartalmazó puffer szintén lelassítja a tripszin aktivitását. Az FBS azonban a tripszinaktivitás gátlásának hatékonyabb módja.
A szérum inaktiválja a tripszint?
A szérum inaktiválja a vesék enzimatikus emésztése során visszamaradó tripszint és a sejtek által ezt követően szintetizált proteolitikus enzimeket. A frissen tripszinezett sejteket szérum hiányában egyrétegűvé lehet növeszteni, feltéve, hogy többször megmosták a tripszin maradék eltávolítása érdekében.
Mennyi adathordozóra van szükség a tripszin deaktiválásához?
Amíg legalább 1:1 arányban használ 5-10% szérumot szérumot tartalmazó tápközeget a tripszinnel, több mint elegendő gátlásnak kell lennie, amelyet centrifugálás követ. és tápközegcsere friss táptalajjal.
