Először is, mind az EcoR1, mind az Xba1 5' túlnyúlást hagy a DNS emésztésekor (ahogy az Nde1 is). Mindkét esetben a 3' vége bemélyedt, ezért a poliermáz bázist adhat hozzá. Másodszor, minden polimeráz csak egy 3'-véghez tud bázist adni, így a Klenow 4 bázist ad mindkét hely visszahúzódó 3' végéhez, hogy tompa végeket hozzon létre.
A restrikciós enzimek hagynak 5-ös foszfátot?
A restrikciós enzimekkel emésztett vektorok és inszertek tartalmazzák a szükséges terminális módosításokat (5'-foszfát és 3'-hidroxil), míg a polimeráz láncreakcióval (PCR) létrehozott fragmensek nem.
A tompa végek leköthetők?
Tompa végű lekötés
A tompa végű lekötés nem foglalja magában a kiálló végek bázispárosítását, így bármely tompa vég egy másik tompa véghez köthető. Tompa végeket olyan restrikciós enzimek hozhatnak létre, mint a SmaI és az EcoRV.
A Taq polimeráz tompa végeket hoz létre?
Igen… A Taq Polymerase A-túlnyúlásokat ad, ha az utolsó kiterjesztési lépést 72 dC-on tartja a PCR-en. Leginkább TA klónozáshoz használják.
Miért használjunk Klenow-fragmenst a DNS-szekvenálás során?
A Klenow-fragmens rendkívül hasznos kutatáson alapuló feladatokhoz, mint például: Kétszálú DNS szintézise egyszálú templátokból . DNS-fragmensek visszahúzódó 3'-végeinek kitöltése, hogy az 5' túlnyúlás tompa legyen . Emésztés a kiálló 3'-es túlnyúlásokon.
