A mintáját ultraszűréssel is eltávolíthatja az előző térfogat 1 tizedére, amely ismét felhígul, és megismétli az UF lépést. A legjobb sómentesítési módszer sómentesítés gélszűréssel 50 mM pufferrel szemben, mint ultraszűrés (klasszikus, nem centrifugális).
Mi a sótalanítás a fehérjetisztításban?
A sótalanítást a fehérjeoldatokból származó sók, a nukleinsavakból a fenol vagy a nem beépült nukleotidok, illetve a konjugált fehérjékből a felesleges térhálósító vagy jelölő reagensek eltávolítására használják.
Hogyan tisztítod a fehérjéket?
A tömeges fehérjetisztítás során a fehérjék izolálásának általános első lépése kicsapás ammónium-szulfáttal (NH4) 2SO4. Ezt növekvő mennyiségű ammónium-szulfát hozzáadásával és a kicsapódott fehérje különböző frakcióinak összegyűjtésével hajtják végre. Ezt követően az ammónium-szulfát dialízissel eltávolítható.
Hogyan puffereli a cserefehérjéket?
A puffercserét azonban úgy hajtják végre, hogy először kiegyenlítjük az oszlopgyantával a pufferrel, amelybe a mintának be kell jutnia. Mindkét esetben a mintát szállító puffer-összetevők az oszlopot az az oldat helyettesíti, amellyel az oszlop előzetesen kiegyensúlyozott.
Az alábbi kromatográfiás technikák közül melyik alkalmazható fehérjék sómentesítésére?
Amint fentebb említettük, a gélszűrés hatékonyan használható fehérje előállításárasótalanítást végezzük, és először a gélszűrős oszlopot vízzel egyensúlyba hozzuk. A puffercserét azonban úgy hajtják végre, hogy először egyensúlyba hozzuk az oszlop gyantát a célpufferrel.
