Mivel a szonikáció potenciálisan lebonthatja a fehérjéket és denaturálhatja fehérjeepitópokat, a következő lépésben megvizsgáltuk az ultrahangos kezelés hatását a fehérje integritására.
Károsíthatja az ultrahangos kezelés a fehérjéket?
Népszerű válaszok (1)
Standard szonikációs protokoll inkább nem okozhat fehérjedarabolódást- az energia túl alacsony. Még csak nem is okozhatja a denaturációját. Denaturálódhat, ha túl sokáig ultrahangos kezeléssel kezeli, és túlmelegíti a mintát. Ha nikkel kromatográfiát használ, más sávok egyszerűen szennyeződések lehetnek.
A szonikáció megszakíthatja a peptidkötéseket?
Az ultrahangos kezelés általában nem tudja felbontani a fehérje elsődleges szerkezetét, mert ez a szerkezet (az aminosavszekvencia) kovalens kötésekből épül fel, amelyek sokszor erősebbek, mint a hidrogénkötések és az ultrahangos kezelés. biztosítsa a kötések megszakításához szükséges energiát.
A szonikáció feltöri a nukleáris membránt?
A rövid, alacsony energiájú ultrahangos kezelés megzavarhatja a plazmamembránt anélkül, hogy túl sok mitokondriális vagy nukleáris membrán törne, ami tapintatos mitokondriumokat eredményez.
Szükséges ultrahangos kezelés a fehérjekivonáshoz?
A membránfehérjék izolálásához szükséges detergens szolubilizálás (pl. SDS) elsősorban a nukleinsavak miatt ragasztószerű lizátumot eredményez. Ezért ilyen esetekben ultrahangos kezelésre van szükség a nukleinsavak felbomlásához. Az ultrahangos kezelés sok hőt termel és nem jósok fehérje.
